W pracy przedstawiono wyniki badań nad miniaturowym systemem do elektroforetycznej separacji DNA, wykorzystującym układ
detekcji fluorescencyjnej. Opisano technologię całkowicie szklanego biochipa z krzyżową konfiguracją kanałów mikrofluidycznych. W opracowanym
stanowisku laboratoryjnym przeprowadzono elektroforezę żelową DNA znakowanego barwnikami "czerwonymi" (Cy5, TO-PRO-3) z detekcją
fluorymetryczną w czasie rzeczywistym. Sygnał detektora przetworzono cyfrowo, uzyskując charakterystyki intensywności fluorescencji w funkcji
czasu.
Abstract. In the paper, miniature system with fluorometric detection for electrophoretic separation of DNA is reviewed. Technology of all-glass
biochip with cross-shaped microfluidic channels is described. Gel electrophoresis of DNA labeled with red-line markers (Cy5, TO-PRO-3) was
conducted in laboratory set-up with real-time fluorometric detection. Detection signal was processed into time-graphs of fluorescence intensity.
(Miniature system for capillary gel electrophoresis of DNA with fluorescence detection).
Słowa kluczowe: biochip, elektroforeza żelowa, DNA, fluorescencja.
Keywords: biochip, gel electrophoresis, DNA, fluorescence.
Wstęp
Elektroforeza żelowa jest powszechnie stosowaną,
niezwykle czułą techniką analizy materiału genetycznego,
umożliwiającą m.in. sekwencjonowanie DNA, analizę
produktu amplifikacji metodą PCR lub wykrywanie
potencjalnie onkogennych mutacji genetycznych. Zasada
działania elektroforezy żelowej opiera się na rozdzieleniu
cząsteczek różniących się wielkością/masą podczas ich
migracji przez żel w polu elektrycznym. Ze względu na
sitową strukturę żelu, cząstki DNA ulegają separacji na
"frakcje" o różnej szybkości migracji elektroforetycznej.
W powszechnie stosowanych urządzeniach do
elektroforezy płytowej (slab-gel) separację przeprowadza
się w warstwie żelu, otrzymując - po wybarwieniu - obraz
prążków DNA. Badany materiał genetyczny charakteryzuje
się na podstawie szerokoś
[...]